第194回金曜会のお知らせ

 今月27日に開催いたします第194回金曜会のご案内をさせていただきます。

今回の演者はNIDDKの犬塚義先生です。犬塚先生は2006年京都大学をご卒業後、消化器内科の道に進まれ、数ある消化器疾患の中からウイルス性肝炎を選んで研究に従事してこられました。今春で約5年間のNIHでの研究を一区切りしてご出身の京都大学に戻られるということで、帰国前にお話をお願いいたしました。
犬塚先生はまた、金曜会の幹事として、あるいは当地における消化器内科バックグラウンドの方々のハブとしても活躍してこられました。帰国前最後の交流の機会として、多くの皆様に講演会、懇親会にご参加いただけたらと思います。

なお未発表データも多く含まれるとのことで、講演会はin person限定での開催を予定しておりますが、Bethesdaキャンパスのリスクレベルがmedium以上の場合はオンライン開催に当日突然変更となる可能性があります。ただしその場合でも懇親会に関しては予定通りin personで開催させていただく予定です。

多くの皆様にご参加いただけることを心よりお待ち申し上げております！


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第194回 NIH金曜会

講演会：2023年1月27日午後6時よりin person開催
　　　　Building 37 4階カンファレンスルーム (Room #4041/4107)
　
　演者：犬塚義先生（NIDDK）
　演題：ゲノムワイドCRISPRスクリーニングにより特定されたHepatitis B Virus感染の宿主依存因子
　　　　～僕がノックアウトした遺伝子と僕をノックアウトしたUS life～
　
懇親会：午後8時ごろより　Rock Bottomにて

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講演 要旨

B型肝炎ウイルス(HBV)はヒトやチンパンジーにしか感染せず、宿主のレンジが限られていることは、HBV研究発展の幅を狭めています。渡米後テーマが決まっていなかった自分は、「如何にしてHBVをマウスに感染させるか」というテーマに取り組むことに決めました。そこで近年、様々なウイルスの宿主因子の同定に成功し注目を浴びている「ゲノムワイドCRISPRスクリーニング」に着目しました。

初めにCRISPRスクリーニングに必要な蛍光タンパク質RFP遺伝子をゲノムに組み込んだHBVレポーターウイルス(HBV-RFP)を開発しました。HBV-RFPを用いたゲノムワイドloss-of-function CRISPRスクリーニング手法を確かなものとするため、マウス細胞で始める前にHBV感染が確立しているヒト肝癌細胞株であるHepG2NTCP細胞を用いて遺伝子スクリーニングを行い、これまで報告のない未知のHBV宿主依存性因子を同定することを目的としました。Inducible Cas9 systemを用いたHepG2NTCP/Cas9細胞に、19,114個のヒト遺伝子を標的とするgRNAライブラリを形質導入してゲノム編集をし、HBV-RFPに感染させRFP陰性の非感染細胞をFACSでソーティングしました。次世代シークエンスとバイオインフォマティクス解析を行い、HBV感染の宿主依存因子として上位100遺伝子の中から肝細胞で発現を認める63遺伝子を決定しました。この中には、HBVのレセプターとして知られるNTCPを代表とする既知のHBVプロウイルス因子が複数含まれていました。検証のため、CRISPR-Cas9により63遺伝子の遺伝子ノックアウト細胞を作製し野生型HBVを感染させ、親細胞に比して有意に細胞内HBV RNAの減少を認めた14遺伝子を同定しました。さらに初代ヒト肝細胞を用いてsiRNAによるノックダウンとHBV感染実験を行い複数のHBVプロウイルス遺伝子を絞り込み、未知の新たな因子を見つけました。

発表当日は上記の研究を中心にお話しいたしますが、このスクリーニング法は「マウスにHBVを感染させる」ために開発したものであり、現在マウスのHBV感染に必要な因子を同定するための研究を進めているところですが、当日は時間と体力と集中力の許す限りこれらの取り組みもお話しできたらと思います。副題のUS lifeの写真を盛り込んだプレゼンにお付き合いください。